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http://repositorio.ufgd.edu.br/jspui/handle/prefix/4211
Tipo: | Trabalho de Conclusão de Curso |
Título: | Padronização da técnica molecular RFLP-IS6110 para estudos epidemiológicos da tuberculose em Mato Grosso do Sul |
Título(s) alternativo(s): | Standardization of the molecular technique RFLP-IS6110 for epidemiologic studies of tuberculosis in Mato Grosso do Sul |
Autor(es): | Santos, Paulo César Pereira dos |
Primeiro Orientador: | Croda, Julio Henrique Rosa |
Resumo: | A tuberculose (TB) é uma doença de grande importância para a saúde global que causa milhões de mortes de pessoas a cada ano. Em 2015, a taxa de incidência a cada 100 mil habitantes foi de 28,4 em Mato Grosso do Sul e 39,4 em Dourados. Através de ferramentas moleculares torna- se possível caracterizar e identificar linhagens do Mycobacterium tuberculosis que auxiliará na elaboração de medidas de controle da doença. A técnica de RFLP-IS6110, quando comparada com outras ferramentas moleculares, é considera padrão-ouro por conta de seu alto poder discriminatório para esses estudos. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi padronizar a técnica RFLP-IS6110 para estudos epidemiológicos da tuberculose a fim de identificar as características genotípicas das populações de M. tuberculosis em Mato Grosso do Sul. As cepas de M. tuberculosis foram isoladas das bacteriotecas do Laboratório Central e Laboratório de Pesquisa em Ciências da Saúde e o protocolo original para a genotipagem das cepas foi adaptado para a sua utilização aqui no estado. O protocolo consistiu pelas etapas de digestão com a enzima de restrição PvuII, seguindo de eletroforese, transferência por Southern blot, hibridização e revelação colorimétrica. Os perfis genotípicos obtidos na membrana foram analisados utilizando o banco de dados RIVM–Bionumerics; Applied Maths, Sint-Martens- Latem, Belgium. Diferentes padrões de bandas estavam presentes nas membranas, afirmando a clivagem dos fragmentos do IS6110. Entretanto, algumas bandas eram difíceis de serem identificadas, então, adaptações como aplicação de uma menor alíquota de amostra no gel e maior tempo de revelação foram adotados para uma melhor qualidade das membranas. Com isso, foi possível agrupar cepas com os mesmos perfis moleculares, formando clusters quando dois ou mais isolados apresentaram o mesmo perfil genotípico. Foi possível observar a importância da padronização e aplicação da técnica de RFLP-IS6110 para estudos epidemiológicos em tuberculose no estado de Mato Grosso do Sul, uma vez que é possível utilizá-la como uma ferramenta para melhor conhecer a dinâmica da doença aqui no estado. |
Abstract: | Tuberculosis (TB) is a disease of major importance to global health that causes millions of deaths annually. In 2015, the incidence rate per 100 thousand inhabitants was 28.4 in Mato Grosso do Sul and 39.4 in Dourados. Through molecular tools for epidemiological studies, it is possible to characterize and identify strains of Mycobacterium tuberculosis, assisting in the development of disease control measures. The RFLP-IS6110 technique, when compared with other molecular tools, it is considered gold standard because of its high discriminatory power for these studies. In this context, the aim of this study was to standardize the IS6110 RFLP technique for epidemiologic studies of tuberculosis to identify genotypic characteristics of M. tuberculosis populations in Mato Grosso do Sul. The M. tuberculosis strains were isolated from the Central Laboratory and Research Laboratory in Health Sciences’ bacterial collections and the original protocol for genotyping strains was adapted for its use here in the state. The protocol consisted of digestion step with the restriction enzyme PvuII, followed by electrophoresis, Southern blot, hybridization and colorimetric revelation. Genotypic profiles obtained in the membrane were analysed using the RIVM-BioNumerics database; Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgium. Different patterns of bands were present in the membranes of IS6110 stating cleavage fragments. However, some bands were difficult to be identified, so adjustments such as applying a lower sample aliquot in the gel and longer revelation time were adopted for a better quality of the membranes. Thus, it was possible to group strains that had the same molecular profiles, forming clusters when two or more isolates showed the same genotypic profile. It was possible to observe the importance of standardization and application of RFLP-IS6110 technique for epidemiologic studies of tuberculosis in Mato Grosso do Sul since it is possible to use it as a tool for a better understanding of the disease dynamics in the state. |
Palavras-chave: | Mycobacterium tuberculosis Tipagem molecular Molecular typing Epidemiologia Epidemiology |
CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editor: | Universidade Federal da Grande Dourados |
Sigla da Instituição: | UFGD |
metadata.dc.publisher.department: | Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais |
Citação: | SANTOS, Paulo César Pereira dos. Padronização da técnica molecular RFLP-IS6110 para estudos epidemiológicos da tuberculose em Mato Grosso do Sul. 2016. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas) – Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais, Universidade Federal da Grande Dourados, Dourados, MS, 2016. |
Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://repositorio.ufgd.edu.br/jspui/handle/prefix/4211 |
Data do documento: | 30-Set-2016 |
Aparece nas coleções: | Ciências Biológicas |
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